Caenorhabditis elegans como modelo de infección para el estudio de antimicrobianos / Caenorhabditis elegans as an infection model for the study of antimicrobials

Resumen A pesar de algunas limitaciones éticas, los animales juegan un papel importante como anfitriones sustitutos para investigar los mecanismos fisiopatológicos de enfermedades con el fin de indagar en ellos medicamentos contra diferentes patologías. Uno de los grandes problemas en salud pública a nivel mundial en el contexto farmacológico es la producción de antibióticos y la ocurrencia de resistencia microbiana, además, cada vez resulta más complejo el uso de modelos animales por las restricciones bioéticas actuales, no obstante, es necesario usar modelos simples en los estudios preliminares que permitan evaluar las interacciones huésped-patógeno-antimicrobiano. Al validar que Caenorhabditis elegans es susceptible a varias bacterias y además tiene la capacidad de responder a estímulos ambientales con cambios observables en el comportamiento tras ser alimentado con diversas bacterias, resulta muy útil usarlo en este tipo de investigaciones ya que tiene una vida promedio corta y no cuenta con restricciones éticas para su uso. Por lo anterior, en este artículo se revisa la susceptibilidad que tiene C.elegans de infectarse con diferentes bacterias, además, ya que aún no se ha validado completamente como modelo para poner a prueba antimicrobianos se propone que este nematodo es útil como modelo In vivo para evaluar infecciones y tratamientos antibacterianos.

Abstract Despite some ethical limitations, animals play an important role as surrogate hosts in investigating the pathophysiological mechanisms of disease in order to test drugs against different pathologies. One of the great problems in public health worldwide in the pharmacological context is the production of antibiotics and the occurrence of microbial resistance, the use of animal models is becoming increasingly complex due to current bioethical restrictions, however, it is necessary to use models simple in preliminary studies that allow evaluating host-pathogen-antimicrobial interactions. Validating that Caenorhabditis elegans is susceptible to various bacteria and also has the ability to respond to environmental stimuli with observable changes in behavior after being fed with various bacteria, it is very useful to use it in this type of research since it has a short average life and does not have ethical restrictions for its use. Therefore, this article reviews the susceptibility of C. elegance to become infected with different bacteria, in addition, since it has not yet been fully validated as a model to test antimicrobials, it is proposed that this nematode is useful as an in vivo model. to evaluate infections and antibacterial treatments.

Canales de calcio como blanco de interés farmacológico / Calcium channels as a pharmacological target

Resumen Los canales de calcio son proteínas de membrana que constituyen la vía más importante para el ingreso del ion calcio (Ca2+) a la célula. Al abrirse, permiten el ingreso selectivo del ion, iniciando una variedad de procesos como contracción muscular, secreción endocrina y liberación de neurotransmisores, entre otros. Estas proteínas se agrupan en tres categorías de acuerdo con sus propiedades estructurales y funcionales: (i) Canales de Ca2+ operados por interacción receptor-ligando (ROCC), (ii) Canales activados por parámetros físicos (Transient Receptor Potencial, TRP) y (iii) Canales de Calcio dependientes de voltaje (VDCCs), siendo estos últimos los más estudiados debido a su presencia en células excitables. Dada la importancia de Ca2+ en la fisiología celular, los canales de Ca2+ constituyen un punto de acción farmacológica importante para múltiples tratamientos y, por tanto, son objeto de estudio para el desarrollo de nuevos fármacos. El objetivo de esta revisión es explicar la importancia de los canales de Ca2+ desde una proyección farmacológica, a partir de la exploración documental de artículos publicados hasta la fecha teniendo en cuenta temas relacionados con la estructura de los canales Ca2+, sus propiedades biofísicas, localización celular, funcionamiento y su interacción farmacológica.

Abstract Calcium channels are membrane proteins that constitute the most important route for the entry of the calcium ion (Ca2+) into the cell. When opened, they allow selective ion entrance, starting a variety of processes such as muscular contraction, endocrine secretion and neurotransmitters release, among others. These proteins are classified in three categories according to their structural and functional properties: (i) Receptor-operated calcium channels (ROCC), (ii) Channels activated by physical parameters (Transient Receptor Potential or TRP-channels) and (iii) Voltage-dependent calcium channels (VDCCs), the latter being the most studied due to its presence in excitable cells. Given the importance of Ca2+ in the cellular physiology, the calcium channels constitute targets for pharmacological action for multiple treatments, and therefore, they are object of study for the development of new medicaments. The objective of this review is to explain the importance of the channels of Ca2+ from a pharmacological projection, by exploring the articles published, bearing in mind topics related to the structure of the channels Ca2+, properties of their biophysics, cellular location, functioning and their pharmacological interaction.

Potenciales estrategias terapéuticas basadas en péptidos para mitigar la infección por SARS-CoV-2 / Potential Peptide-Based Therapeutic Strategies to Mitigate SARS-COV-2 Infection

Resumen La nueva pandemia por SARS-CoV-2 ha incentivado la búsqueda de alternativas terapéuticas que reduzcan los índices de mortalidad. Dentro de estas, el uso de péptidos se destaca por su facilidad de síntesis, fácil producción a gran escala, especificidad en la respuesta inmunológica, versatilidad en la dosificación, alta pureza, economía, entre otros. Esto ofrece una excelente opción al enfoque tradicional, con lo que se resta la evaluación de su eficacia, eficiencia y seguridad a nivel clínico.

Abstract The new pandemic by SARS-CoV-2 has encouraged the search for therapeutic alternatives that reduce mortality rates; within these, the use of peptides stands out for its ease of synthesis; easy production on a large scale, specificity in the immune response, versatility in dosage, high purity, economy, among others; offering an excellent option to the traditional approach, failing to evaluate its effectiveness, efficiency and safety at clinical level.

Perspectivas en investigación: células HEp-2 infectadas con EB's de Chlamydia trachomatis serovar 2 (VR-902B) / Chlamydia trachomatis: Research Perspectives. HEp-2 Cells Infected with EB's from Chlamydia trachomatis serovar 2 (VR-902B): Research Perspectives

Resumen Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) es una bacteria Gram negativa inmóvil, caracterizada por ser un microorganismo intracelular obligado y por poseer un ciclo reproductivo en el que puede distinguirse una forma infecciosa extracelular metabólicamente inerte (cuerpo elemental - EB's), y una forma no infecciosa intracelular y activa (cuerpo reticulado - RB's). C trachomatis se caracteriza por causar infección en humanos, está relacionada con enfermedades de transmisión sexual e infecciones oculares; por lo que puede conllevar a secuelas de interés, si no se da un tratamiento oportuno. El objetivo de este estudio fue optimizar el modelo de infección de C. trachomatis en células HEp-2 con cuerpos elementales (EB's) de C. trachomatis serovar L2. Inicialmente, se establecieron las condiciones para el crecimiento adecuado de las células HEp-2 en tiempo y con una confluencia del 90%, para continuar con la optimización de un protocolo de infección. La infección fue confirmada a partir de la coloración con Giemsa permitiendo evaluar características morfológicas tanto de las células HEp-2 sin infectar e infectadas, y así mismo, de los cuerpos elementales de C. trachomatis. Finalmente, se corroboró la infección con la técnica de inmunofluorescencia directa que detecta la proteína de membrana MOMP de C. trachomatis. Tras los ensayos realizados se evidenció la presencia de cuerpos elementales próximos y dentro del citoplasma celular, así como células vacuoladas y daño celular causado por la infección.

Abstract Chlamydia trachomatis (C. Trachomatis) is a Gram negative unmoving bacterium, characterized by being an obligate intracellular microorganism and having a reproductive cycle in which a metabolically inactive extracellular infectious form (elementary body - EB's) can be distinguished from an intracellular active and non-infectious form (reticulated body - RB's). C trachomatis is characterized by causing infection in humans, is related to sexually transmitted diseases and eye infections, so it can lead to sequelae of interest if timely treatment is not given. The objective of this study was to optimize the infection model of C. trachomatis in HEp-2 cells with elementary bodies (EB's) of C. trachomatis serovar L2. Initially, the conditions for the adequate growth of HEp-2 cells were established in time and with a confluence of 90%, to continue with the optimization of an infection protocol. The infection was confirmed from the staining with Giemsa allowing to evaluate morphological characteristics of both uninfected and infected HEp-2 cells and also of the elementary bodies of C. trachomatis. Finally, the infection was corroborated with the direct immunofluorescence technique, that detects the C. trachomatis MOMP membrane protein. After the tests were performed, the presence of elementary bodies nearby and within the cellular cytoplasm was evidenced, as well as vacuolated cells and cellular damage caused by the infection.

Actividad in vitro de los extractos etanólicos de Lantana camara L., Petiveria alliacea L. y Lippia dulcis T. frente a bacterias patógenas / In vitro activity of the ethanolic extracts from Lantana camara L., Petiveria alliacea L. and Lippia dulcis T. against pathogenic bacteria

Resumen Introducción. La biodiversidad colombiana y los saberes tradicionales permiten la exploración de plantas medicinales con potencial actividad antimicrobiana que podrían usarse para tratamiento de infecciones. Objetivos. Determinar la actividad antibacteriana de extractos etanólicos de Lantana camara L., Petiveria alliacea L. y Lippia dulcis T. sobre Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus vulgaris ATCC 6380 y Staphylococcus aureus ATCC 25923. Materiales y métodos. Se realizó la adquisición del material vegetal y caracterización botánica, se obtuvieron los extractos etanólicos por percolación y se realizó caracterización fitoquímica preliminar mediante cromatografía en capa delgada (CCD). Se evaluó la actividad antibacteriana, mediante pruebas de difusión con disco y difusión en agar en concentraciones de 1mg/mL y 2mg/mL; para extractos activos se estableció la Concentración Inhibitoria mínima (CIM) y Concentración Mínima Bactericida (CMB). Para análisis estadístico se realizó prueba t de Student. Resultados y discusión. Staphylococcus aureus ATCC 25923 fue sensible con Lantana camara L. y Lippia dulcis T. siendo este último activo también sobre Proteus vulgaris ATCC 6380 con efecto inhibitorio superior al 50%. El extracto de Lippia dulcis T. presentó la mayor actividad inhibitoria sobre S. aureus (CMI: 1,95 mg/mL). Ningún extracto mostró actividad sobre Escherichia coli ni Pseudomonas aeruginosa. Metabolitos secundarios, especialmente terpenoides y cumarinas fueron detectados en L. dulcis. Conclusiones. El estudio muestra que productos naturales derivados de plantas medicinales como los extractos etanólicos de Lantana camara y Lippia dulcis, presentan actividad antibacteriana sobre S. aureus y P. vulgaris y podrían ser alternativa promisoria para tratamiento de infecciones bacterianas.

Abstract Introduction. Colombian biodiversity and traditional knowledge allow the exploration of medicinal plants with potential antimicrobial activity, which could be used to treat infections. Objectives. To determine the antibacterial activity of ethanolic extracts of Lantana camara L., Petiveria alliacea L. and Lippia dulcis T. on Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus vulgaris ATCC 6380 and Staphylococcus aureus ATCC 25923. Materials and methods. Performed the acquisition of plant material and botanical characterization, ethanolic extracts were obtained by percolation and preliminary phytochemical characterization was performed by thin layer chromatography (CCD). The antibacterial activity was evaluated by disc diffusion and agar diffusion tests at concentrations of 1mg/mL and 2mg/mL; for active extracts, the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (CMB) were established. For statistical analysis, Student's t test was performed. Results and discussion. Staphylococcus aureus ATCC 25923 was sensitive with Lantana camara L. and Lippia dulcis T. The latter being also active on Proteus vulgaris ATCC 6380 with inhibitory effect higher than 50%. The extract of Lippia dulcis T. had the highest inhibitory activity on S. aureus (MIC: 1.95 mg/mL). No extract showed activity on Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. Secondary metabolites, especially terpenoids and coumarins were detected in L. dulcis. Conclusions. The study shows that natural products derived from medicinal plants such as the ethanolic extracts of Lantana camara and Lippia dulcis have antibacterial activity on S. aureus and P. vulgaris and could be a promising alternative for the treatment of bacterial infections.

Principales reguladores hormonales y sus interacciones en el crecimiento vegetal / Main hormonal regulators and their interactions in plant growth

Resumen Una hormona vegetal o fitohormona es un compuesto producido internamente por una planta, que ejerce su función en muy bajas concentraciones y cuyo principal efecto se produce a nivel celular, cambiando los patrones de crecimiento de los vegetales y permitiendo su control. Los reguladores vegetales son compuestos sintetizados químicamente u obtenidos de otros organismos y son, en general, mucho más potentes que los análogos naturales. Es necesario tener en cuenta aspectos críticos como oportunidad de aplicación, dosis, sensibilidad de la variedad, condición de la planta, etc., ya que cada planta requerirá de unas condiciones específicas de crecimiento que pueden afectarse por la concentración de ellos en el medio. Los reguladores vegetales son productos sintéticos que se han convertido en las primeras herramientas capaces de controlar el crecimiento y actividad bioquímica de las plantas por lo que su uso ha aumentado en los últimos años. Esta revisión busca hacer una recopilación bibliográfica de los primeros acontecimientos de la aplicación de los reguladores de crecimiento vegetal. Se presentan las principales características fisiológicas que pueden desarrollar la aplicación de estos sobre el crecimiento vegetal a nivel celular y su repercusión a nivel fenotípico; además, se describen las principales fitohormonas más conocidas en la aplicación biotecnológica. Entre ellas se encuentran auxinas, giberelinas, citoquininas, ácido abscísico, ácido salicílico, poliaminas, jasmonatos y derivados, brasinoesteroides, etileno y estrigolactonas. Se detallan las principales funciones a nivel del metabolismo vegetal y sus posibles interacciones intra e intercelular.

Abstract A vegetal hormone or phytohormone is a compound produced inside by a plant, that work in low concentrations and whose mainly effect occurs at the cellular level, changing the patterns of grow in vegetal organism and allow their control. The plant grows regulators are synthetic chemical compounds that can be obtained by the organism different to the plants and are more stronger that natural analogues, is necessary have in consideration different aspects like application opportunity, concentration, sensibility, plant condition, it's because every plant requires specific conditions of grow that can be affected by phytohormonal concentration in the soil or medium. The vegetal regulators are synthetic products that it has been converted in the mainly tool available to control the growing and biochemical activity of the plant and for that reason their use are increased in the last years. This review makes a bibliography compilation of the first events in the beginning of vegetal plant regulators application and presents the mainly physiologic characteristics that can be developed by application of vegetal hormones and their action in cellular and phenotypic response, furthermore we explain some of the mechanisms of action of the mainly ten phytohormones more knowledge in the biotechnological application: auxins, gibberellins, cytokinins, abscisic acid, salicylic acid, polyamines, jasmonates and derived compounds, brassinosteroids, ethylene, and strigolactones. We describe their mainly functions to vegetal metabolism and their possible interactions intracellular and extracellular.

Tratamientos alternativos de medicina tradicional para Chlamydia trachomatis, agente causal de una infección asintomática / Alternative Treatments of Traditional Medicine for Chlamydia trachomatis, Causal Agent of an Asympomatic Infection

Resumen En la actualidad, Chlamydia trachomatis (CT) es una de las causas más frecuentes de infecciones de transmisión sexual (ITS) y morbilidad reproductiva en el mundo, Incluye tanto países desarrollados como en vía de desarrollo, con un reporte alrededor de 92 millones de casos anuales. CT es una bacteria intracelular obligada cuyo inicio de la infección es asintomático, causa infección crónica, puede generar infección persistente y complicaciones como cáncer de ovario. Las infecciones por CT son asintomáticas en el 70% de las mujeres y el 40% de los hombres, lo que dificulta el diagnóstico en las fases tempranas de la infección y el tratamiento oportuno, lo que conlleva a un aumento en los contagios en la población. De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS), el tratamiento para CT incluye la utilización de antibióticos tipo tetraciclinas, macrólidos y fluoroquinolonas. Sin embargo, a pesar de su alta tasa de eficacia, cada vez son más recurrentes las infecciones. Reportes recientes han demostrado resistencia por parte de los cuerpos elementales y se ha podido determinar que los antibióticos disminuyen la población de lactobacillus vaginales beneficiosos, causando mayores complicaciones en los pacientes. Basados en estos hallazgos, las investigaciones actuales se han centrado en terapias alternativas que reduzcan la actividad antichlamydial y que sean de libre acceso, generando el menor daño posible en los pacientes.

Abstract Currently, Chlamydia trachomatis (CT) is one of the most frequent causes of sexually transmitted infections (STIs) and reproductive morbidity in the world, including both developed and developing countries, with a report of around 92 million annual cases. CT is an obligate intracellular bacterium whose onset's infection is asymptomatic, causes chronic infection, can generate persistent infection and complications such as ovarian cancer. CT infections are asymptomatic in 70% of women and 40% of men, which makes diagnosis difficult in the early stages of infection and timely treatment, which leads to an increase in infections in the population. According to the World Health Organization (WHO), treatment for TC includes the use of antibiotics such as tetracyclines, macrolides and fluoroquinolones. However, despite their high efficacy rate, infections are becoming more frequent. Recent reports have shown resistance on the part of elementary bodies and it has been determined that antibiotics decrease the beneficial vaginal lactobacillus population, causing greater complications in patients. Based on these findings, current research has focused on alternative therapies that reduce antichlamydial activity and that are freely accessible, generating the least possible harm to patients.

Tratamientos alternativos de medicina tradicional para Chlamydia trachomatis, agente causal de una infección asintomática / Alternative Treatments of Traditional Medicine for Chlamydia trachomatis, Causal Agent of an Asympomatic Infection

En la actualidad, Chlamydia trachomatis (CT) es una de las causas más frecuentes de infecciones de transmisión sexual (ITS) y morbilidad reproductiva en el mundo, Incluye tanto países desarrollados como en vía de desarrollo, con un reporte alrededor de 92 millones de casos anuales. CT es una bacteria intracelular obligada cuyo inicio de la infección es asintomático, causa infección crónica, puede generar infección persistente y complicaciones como cáncer de ovario. Las infecciones por CT son asintomáticas en el 70% de las mujeres y el 40% de los hombres, lo que dificulta el diagnóstico en las fases tempranas de la infección y el tratamiento oportuno, lo que conlleva a un aumento en los contagios en la población. De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud (OMS), el tratamiento para CT incluye la utilización de antibióticos tipo tetraciclinas, macrólidos y fluoroquinolonas. Sin embargo, a pesar de su alta tasa de eficacia, cada vez son más recurrentes las infecciones. Reportes recientes han demostrado resistencia por parte de los cuerpos elementales y se ha podido determinar que los antibióticos disminuyen la población de lactobacillus vaginales beneficiosos, causando mayores complicaciones en los pacientes. Basados en estos hallazgos, las investigaciones actuales se han centrado en terapias alternativas que reduzcan la actividad antichlamydial y que sean de libre acceso, generando el menor daño posible en los pacientes.

Asociación de HSP60 de Chlamydia trachomatis y desarrollo de cáncer de ovario / Association between Hsp60 of Chlamydia trachomatis and ovarian cancer

Resumen Las proteínas de choque térmico (HSP) son una familia de proteínas altamente conservadas cuya expresión se regula por la exposición a condiciones de estrés. Chlamydia trachomatis (CT) es una bacteria intracelular obligada de transmisión sexual causante de infección crónica y persistente que posibilita la expresión de proteínas tipo HSP, una de estas proteínas es la HSP60 Clamidial (cHSP60) que posee una homología del 50% con respecto a la proteína HSP60 humana. Esta revisión presenta estudios immunoepidemiológicos que han demostrado una asociación entre la respuesta inmune a cHSP60 y secuelas de la infección por CT generadas por la inflamación crónica, una de estas secuelas probablemente es el desarrollo de cáncer de ovario, patología que según la OMS es uno de los cánceres ginecológicos más letales y ocupa el quinto lugar en muertes por cáncer entre las mujeres. En esta revisión se discute como la presencia de la cHSP60 ocasiona una respuesta de anticuerpos prolongada como una fuente de estimulación antigénica e inflamación crónica, ocasionando reactividad cruzada que se asocia al desarrollo de cáncer de ovario.

Abstract Heat Shock Proteins are a family of highly conserved proteins and their expression is regulated by exposure to stress conditions. Chlamydia trachomatis is an obligate intracellular bacterium, sexually transmitted that causes chronic and persistent infection, which enables the expression of HSP-like protein as HSP60 Chlamydial (cHSP60). cHSP60 shares 50% homology with human protein. This review shows imunoepidemiological studies that have demonstrated an association between the immune response to cHSP60 and sequelae of CT infection generated by chronic inflammation. One of those sequelae is probably the development of ovarian cancer, a pathology that according to WHO is one deadliest gynaecologic cancer and the fifth leading cause of cancer dead among women. In this review, we discuss how cHSP60 causes a prolonged antibody response as a source of antigenic stimulation and chronic inflammation due to cross reactivity with human antigens and its association with the development of ovarian cancer.

Caracterización fenotípica de la cepa N2 de Caenorhabditis elegans como un modelo en enfermedades neurodegenerativas / Phenotypic characterization of the N2 strain of Caenorhabditis elegans as a model in neurodegenerative diseases

Resumen El nematodo C. elegans se estableció desde I960, gracias al biólogo sudafricano Sydney Brenner, como un organismo modelo en investigación. Sus cualidades biológicas permiten mejorar la visión y comprensión de patologías en los seres humanos y otros seres pluricelulares; además, sus fenotipos claros y observables lo convierten en un organismo adecuado para el estudio básico de enfermedades neurodegenerativas, inmunológicas y procesos cancerígenos. Objetivo. Analizar las características fenotípicas de la cepa silvestre N2 de C. elegans para su posterior uso como modelo de tamizaje en el laboratorio de Biotecnología y Genética (Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca). Materiales y Métodos. El nematodo fue cultivado y crecido en el medio NGM con la cepa E. coli OP50. La cepa N2 fue sincronizada para obtener huevos y posteriormente larvas L1. Se estandarizaron los ensayos de longevidad, reproducción, longitud y estrés térmico. Resultados. La caracterización fenotípica de la cepa N2 de C. elegans presentó: una longevidad de 16 a 22 días, una reproducción promedio de 225 crías, la longitud del nematodo fue de 1100±50 μm y la supervivencia bajo estrés térmico evaluada en las dos etapas de desarrollo del nematodo es muy reducida a 37°C en comparación de 35°C; además, los nematodos fueron más resistentes al primer día de adulto joven en comparación con el sexto día de adulto. Conclusiones. Los resultados aportados por este estudio permiten sugerir que las características fenotípicas del nematodo analizadas se encuentran dentro de lo reportado en la literatura, por lo cual es viable usarlo como como modelo biológico en diferentes ensayos tal como lo reportan otros estudios.

Abstract The nematode C. elegans was established since I960, thanks to the South African biologist Sydney Brenner, as a model organism in research. Their biological qualities allow to improve the vision and understanding of pathologies in human and other multicellular beings; In addition, its clear and observable phenotypes make it a suitable organism for the basic study of neurodegenerative, immunological diseases and carcinogenic processes. Objective. To analyze the phenotypic characteristics of the C. elegans N2 wild strain for later use as a screening model in the Biotechnology and Genetics Laboratory (Colegio Mayor de Cundinamarca University). Materials and Methods. The nematode was grown and grown in the NGM medium with the strain E. coli OP50. The N2 strain was synchronized to obtain eggs and later L1 larvae. The tests of longevity, reproduction, length and thermal stress were standardized. Results. The phenotypic characterization of the N2 strain of C. elegans presented a longevity of 16 to 22 days, an average reproduction of 225 offspring, the length of the nematode was 1100 ± 50 μm and the survival under thermal stress evaluated in the two Development stages of the nematode is greatly reduced at 37 ° C compared to 35 ° C; In addition, nematodes were more resistant to the first day of young adult compared to the sixth day of adulthood. Conclusions. The results of this study suggest that the phenotypic characteristics of the nematode analyzed are within the literature, so it is feasible to use it as a biological model in different trials as reported in other studies.

Detección de Chlamydia trachomatis en hombres que tienen sexo con hombres en Bogotá: un estudio piloto / Detection of chlamydia trachomatis in men that have sex with men in Bogotá: a pilot study

Objetivo. Optimizar una técnica PCR que permita evaluar la presencia de C. trachomatis en hisopados anorrectales provenientes de HSH. En Colombia se notifican anualmente más de 70.000 casos nuevos de ITS, de los cuales se estima que aproximadamente el 9.3% corresponde a uretritis entre las que se encuentran las causadas por C. trachomatis. Métodos. Uno de los problemas en el método de detección de C. trachomatis por PCR en muestras de hisopado anorrectal es la extracción de ADN, el uso de equipos automatizados dispuestos en el mercado resulta costoso y en muchos de los casos no están disponibles en el laboratorio clínico de rutina. En este estudio se realizó una PCR para detección de C. trachomatis, estableciendo un protocolo para la toma de muestra y extracción de ADN a partir de hisopos anorrectales. Resultados. Se procesaron 27 muestras correspondientes a HSH voluntarios pertenecientes al Grupo de apoyo y estudio de la Diversidad Sexual (GAEDS) de la Universidad Nacional de Colombia. Se encontraron 5 muestras positivas para C. trachomatis en hombres sintomáticos y asintomáticos relacionado con el riesgo de adquirir infección por sus prácticas sexuales.

Objective. optimize a PCR technique to evaluate the presence of C. trachomatis in anorectal swabs from MSM. In Colombia there are reported each year more than 70,000 new cases of STIs, of which it is estimated that approximately 9.3% is urethritis among which are those caused by C. trachomatis. Methods. DNA extraction is one of the problems in the method of detecting C. trachomatis by PCR anorectal swab samples. Besides, the use of automated equipment arranged on the market is expensive and in many cases the samples are not available in the clinical laboratory routine. In this study it was performed PCR for detection of C. trachomatis protocol establishing the sampling and DNA extraction from anorectal swabs. Results. 27 samples were processed corresponding HSH volunteers belonging to the Support group and study of Sexual Diversity (GAEDS) of the National University of Colombia. 5 samples positive for C. trachomatis associated with both symptomatic and asymptomatic men at high risk of acquiring infection because of their sexual practices were found.

Determinación de IgG contra Chlamidya trachomatis en mujeres con artritis de la Ciudad de Bogotá D.C. Un estudio piloto / Determination of IgG in women infected with Chlamydia trachomatis and reactive- arthritis from Bogota, Colombia: a pilot study

Objetivo. Evaluar la presencia de IgG contra C. trachomatis en mujeres entre 18 a 30 años con diagnóstico de artritis de la ciudad de Bogotá D.C. Métodos. Los grupos de estudio están compuestos por un grupo de casos AR (mujeres con diagnóstico de artritis reumatoide y reactiva) y un grupo control. Se obtuvieron muestras de suero y se realizó la determinación cuantitativa de IgG contra C. trachomatis, la determinación PCR (proteína C reactiva) y FR (factor reumatoide). Resultados. Las variables de talla y peso descritas en la población de estudio, muestran un comportamiento homogéneo, por lo cual no interfieren en los resultados obtenidos. Las medias se compararon por los test Mann Whitney y t test no pareado. El porcentaje de resultados positivos en la determinación cualitativa de PCR fueron de: 36,6% para el grupo de casos y 14,5% para el grupo control. En la determinación cualitativa de FR el porcentaje de resultados positivos fueron: 48,8% para el grupo de casos y 5,3% para el grupo control. Finalmente, el porcentaje de resultados positivos en la determinación de anticuerpos IgG específicos contra C trachomatis fue de 2,4% para el grupo de casos y 22,4% para el grupo de controles. Las variables de PCR y FR mostraron mayor frecuencia de resultados positivos en el grupo de casos, en comparación con el grupo control, lo cual se correlaciona con la existencia de procesos inflamatorios propios del desarrollo de artritis. Sin embargo el grupo control presentó mayor frecuencia de anticuerpos IgG específicos contra C. trachomatis en comparación con el grupo de casos. Estos resultados hacen necesario evaluar a futuro, el comportamiento de las pacientes del grupo control con resultados positivos de IgG contra C. trichomatis que permitirían observar una posible aparición de síntomas relacionados con artritis.

Objective. Evaluate the presence of IgG in women infected with C. trachomatis, and diagnosed with arthritis, aged 18-30 years, in Bogota, Colombia. Methods. This project is composed of two study groups: Firstly, female cases diagnosed with rheumatoid reactive-arthritis and secondly, a control group. Quantitative determination of IgG in serum samples from patients with C. trachomatis. Were determined also, PCR determination (C reactive protein) and RF (rheumatoid factor) were performed. The statistical analysis included the comparison of means, using Mann Whitney and unpaired t test. Results. Patient samples that were positive by PCR: 36.6% for the female case group, and 14.5% for the control group. In the qualitative determination of RF positives, results were: 48.8% for the case group and 5.3% for the control group. Finally, the percentages of positive results for IgG antibodies determination against C. trachomatis were: 2.4% for the case group and 22.4% for the control group. PCR and FR variables showed higher frequency of positive results in the female case group compared with the control group, which correlates with the presence of inflammatory processes, where it is typical in the development of arthritis. However, the control group had increased frequency of specific IgG antibodies against C. trachomatis, when it is compared with the case female group. These results need to be evaluated in the future, where, the control group that tested positive for IgG against C. Trachomatis, would allow to observe the possible apparition of symptoms related to arthritis.

Regulación de la familia de proteínas BCLl-2 en células infectadas con Chlamydia Trachomatis / Regulation of the bcl-2 to family in cells infected with Chlamydia Trachomatis

El presente artículo revisa los mecanismos inhibitorios de la apoptosis usados por Chlamydia trachomatis frente a la familia de proteínas Bcl-2, para lograr su supervivencia intracelular. Chlamydia trachomatis es una bacteria intracelular obligada Gram negativa responsable de la infección de transmisión sexual más común en el mundo; éste microorganismo es capaz de inhibir la apoptosis de la célula huésped durante su ciclo de desarrollo, obteniendo un refugio seguro para su supervivencia. Frente a estímulos como la infección de la célula por un patógeno, la familia de proteínas Bcl-2 regula la apoptosis por medio de la liberación del citocromo c de la mitocondria para desencadenar la muerte celular programada (MCP). Ct usa diversos mecanismos de regulación antiapoptótica para sobrevivir dentro de la célula huésped; dentro de ellos se observa la secreción de proteínas tales como CPAF y CADD, la escisión de la proteína Bid, el secuestro de Bad y en general el bloqueo de proteínas pertenecientes a la familia Bcl-2 con dominio BH3, que afectan directamente la vía de mitocondrial ocasionando la persistencia, desarrollo y replicación de Ct en la célula huésped.

Chlamydia trachomatis (Ct) is a Gram-negative obligate intracellular bacteria responsible for the infection ofmost common sexually transmitted infection in the world; The organism is able to inhibit host cell apoptosis during development cycle, obtaining a safe survival. To stimuli such as infection of the cell by a pathogen, the Bcl-2 familyregulates cellapoptosisreleasing cytochrome c from mitochondria to trigger programmed cell death (PCD). Ct used various anti-apoptotic regulation mechanisms to survive within the host cell, such as:1. Proteins secretion of CPAF and CADD, 2. The cleavage of the protein Bid, 3.The Bad kidnapping and blockingproteins, belonging to the Bcl-2 family -(BH3 domain). All these mechanisms affect the cell mitochondrial pathway causingpersistence infection, development and Ct replicationwithin the host cell.The objective of this review is to show one of the anti-apoptotic mechanisms, which Ct can survive within the host cell, evading the immune systemresponse.

Comparación del cultivo celular de HeLa y HEp-2: Perspectivas de estudios con Chlamydia trachomatis / Comparison of cell culture HeLa and HEp-2: Studies prospects Chlamydia trachomatis

Objetivo. Estandarizar el cultivo de células HeLa en diferentes condiciones, con el fin de utilizarlo en protocolos de infección con Chlamydia trachomatis serovar L2. Materiales y métodos. Este estudio se llevó a cabo en cuatro fases principales que son: 1.Viabilidad celular por la técnica de azul de tripán y su posterior observación, 2. Estandarización del cultivo de células HeLa, 3. Coloración de Giemsa, 4. Cultivo de células HEp-2.Resultados. Se determinó que la línea celular HeLa debe ser cultivada en medio DMEM, 0,1% de L- glutamina, 10% de SFB. Así mismo, que la coloración de Giemsa es mejor realizarla en un tiempo de 40 minutos por que se evidencia una clara definición de núcleo y citoplasma. Frente a la comparación de las dos líneas celulares se obtuvo que la línea HeLa desde el primer día muestra un crecimiento adecuado y alcanza rápidamente la confluencia esperada, en contraposición la línea HEp-2 presenta un crecimiento más lento pero alcanzando la confluencia deseada al último día.

Objective. The goal of this study was to standardize the cultivation of HeLa cells under different conditions, to be used in Chlamydia trachomatis serovar L2 infection's protocols. Materials and Methods. This study was conducted in four phases that are: 1.Cell Viabilidad by trypan blue technique and his subsequent remark, 2. Standardization HeLa cell culture, 3. Giemsa, 4. Cultivation of Hep-2 cells. Results. As a result of standardization it is determined that the HeLa cell line should be cultured in DMEM, 0.1% L-glutamine, 10% FBS.It was determined that the Giemsa perform better over time of 40 minutes that a clear definition of nucleus and cytoplasm is evident. Comparing against both cell lines HeLa was obtained that the line from day growing well and quickly reaches the expected confluence, the opposed line HEp-2 has a slower growth but achieving the desired confluence the last day.

PINK1 overexpression protects against C2-ceramide-induced CAD cell death through the PI3K/AKT pathway.

The etiology of Parkinson's disease (PD) remains unknown. Mutations in several genes, including PINK1, have provided an understanding of the molecular mechanisms of this pathology. We analyzed the role of PINK1 overexpression (wild-type PINK1 or PINK1 with G309D or L347P mutations) on neurotoxicity associated with C2-ceramide exposure in CAD cells. CAD cells were transiently transfected with either PINK1 (wild type or mutated) or with empty vector and then treated with 25-µM C2-ceramide for 6 h. Cell viability and mitochondrial membrane potential were analyzed by flow cytometry, expression of Bax and Bcl-2 was determined by real-time PCR, and AKT phosphorylation was analyzed by western blot. CAD cells overexpressing wild-type PINK1 and treated with C2-ceramide showed lower percentages of depolarized mitochondria, lower expressions of Bax and higher expressions of Bcl-2 than non-transfected cells. In addition, wild-type PINK1 rescued C2-ceramide-induced inhibition of AKT phosphorylation. Overexpression of PINK1 G309D mutation caused an increase of depolarized mitochondria, a decrease of Bax and an increase in Bcl-2 expression levels. PINK1 L4347P mutation was associated with a higher drop in mitochondrial membrane potential and increased expression of Bax, with minimal variation in the expression of Bcl-2. PINK1 mutations did not result in variations of AKT phosphorylation. We suggest that by preventing mitochondrial dysfunction and reinforcing anti-apoptotic and neuronal survival pathways such as Bcl-2 and PI3K/AKT, PINK1 confers a neuroprotective effect against the neurotoxin C2-ceramide. These effects were abrogated by PINK1 mutations.